不可以

根據2018年交通部發布《道路旅客運輸企業安全管理規范》第38條規定：長途客運車輛凌晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸；從事線路固定的機場、高鐵快線以及短途駁載且單程運營里程在100公里以內的客運車輛，在確保安全的前提下，不受凌晨2時至5時通行限制。

如果乘坐的大巴車里程超過100公里，且安排的固定線路包含高速公路，在凌晨2時至5是不可以行使的。

根據根據2018年交通部發布《道路旅客運輸企業安全管理規范》第38條規定，禁止在夜間駕駛客運車輛通行達不到安全通行條件的三級及以下山區公路，司機日間連續駕駛時間不得超過4小時，夜間連續駕駛時間不得超過2小時，每次停車休息時間應不少于20分鐘。

如果夜間長途客車連續駕駛超過2小時，運輸組織是不會組織這個時段的客運活動的。只有符合固定線路，單程運營里程在100公里以內的客運車輛，在確保安全的前提下（夜間長途客車連續駕駛低于2小時），不受凌晨2時至5時通行限制，是可以在高速公路行駛。

擴展資料：

《道路旅客運輸企業安全管理規范》第三十八條 客運企業在制定運輸計劃時應當嚴格遵守客運駕駛員駕駛時間和休息時間等規定：

（一）日間連續駕駛時間不得超過4小時，夜間連續駕駛時間不得超過2小時，每次停車休息時間應不少于20分鐘；

（二）在24小時內累計駕駛時間不得超過8小時；

（三）任意連續7日內累計駕駛時間不得超過44小時，期間有效落地休息；

（四）禁止在夜間駕駛客運車輛通行達不到安全通行條件的三級及以下山區公路；

（五）長途客運車輛凌晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸；從事線路固定的機場、高鐵快線以及短途駁載且單程運營里程在100公里以內的客運車輛，在確保安全的前提下，不受凌晨2時至5時通行限制。

客運企業不得要求客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定駕駛客運車輛。企業應主動查處客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定的行為，發現客運駕駛員違反駕駛時間和休息時間等規定駕駛客運車輛時，應及時采取措施糾正。

參考資料：

中華人民共和國交通運輸部――《道路旅客運輸企業安全管理規范》

《國務院關于加強道路交通安全工作的意見》規定了凌晨2點到5點大巴在高速公路不可以行駛。

根據《國務院關于加強道路交通安全工作的意見》第二條第五款 ?嚴格長途客運和旅游客運安全管理。嚴格客運班線審批和監管，加強班線途經道路的安全適應性評估，合理確定營運線路、車型和時段，嚴格控制1000公里以上的跨省長途客運班線和夜間運行時間，對現有的長途客運班線進行清理整頓，整改不合格的堅決停止運營。

創造條件積極推行長途客運車輛凌晨2時至5時停止運行或實行接駁運輸。客運車輛夜間行駛速度不得超過日間限速的80%，并嚴禁夜間通行達不到安全通行條件的三級以下山區公路。

擴展資料：

夜間遇暴雨、濃霧等影響安全視距的惡劣天氣時，可以采取臨時管理措施，暫停客運車輛運行。加強旅游包車安全管理，根據運行里程嚴格按規定配備包車駕駛人，逐步推行包車業務網上申請和辦理制度，嚴禁發放空白旅游包車牌證。

運輸企業要積極創造條件，嚴格落實長途客運駕駛人停車換人、落地休息制度，確保客運駕駛人24小時累計駕駛時間原則上不超過8小時，日間連續駕駛不超過4小時，夜間連續駕駛不超過2小時，每次停車休息時間不少于20分鐘。有關部門要加強監督檢查，對違反規定超時、超速駕駛的駕駛人及相關企業依法嚴格處罰。

參考資料：

國務院辦公廳官網-《國務院關于加強道路交通安全工作的意見》

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